生物體組織透明化新技術(shù)

SCALEVIEW^®-A2

　　宮脇敦史博士等人開發(fā)了一種水溶狀態(tài)下不會(huì)損壞熒光蛋白，可簡(jiǎn)便使生物體組織透明化的方法。

　　對(duì)于福爾馬林固定的樣本，SCALEVIEW^®-A2是不破壞其光吸收和熒光，同時(shí)可減少光散射的水溶性溶液。僅需將哺乳類動(dòng)物大腦等生物體組織浸泡于SCALEVIEW^®-A2中，即可透明化。

　　SCALEVIEW^®-A2光學(xué)特性——折射率ne（20℃）為1.377-1.381。

HP數(shù)據(jù)：理化學(xué)研究所 腦科學(xué)綜合研究中心細(xì)胞機(jī)能探索技術(shù)開發(fā)小組濱裕先生、宮脇敦史提供

合作：奧林巴斯（Olympus）株式會(huì)社

參考文獻(xiàn)：Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

◆SCALEVIEW^®-A2 操作案例

以透明化小鼠大腦為樣本，SCALEVIEW^®-A2透明化方法操作如下：

1.　固定

①　用4% 多聚甲醛(PFA)/PBS（pH 7.5～8.0）對(duì)小鼠進(jìn)行灌流固定。

②　取出小鼠大腦后，用4%PFA/PBS固定（4℃、10h）， 20% 蔗糖/PBS置換（4℃、24h）。

③　用OCT復(fù)合物對(duì)小鼠大腦進(jìn)行包埋處理后，液氮進(jìn)行冷凍。

④　用PBS對(duì)冷凍腦組織解凍、清洗后，再用4% PFA/PBS進(jìn)行再固定（室溫、20min）

2.　透明化處理

⑤　將固定好的小鼠大腦浸泡在SCALEVIEW^®-A2中（室溫）。

注意點(diǎn)：
　　１．每個(gè)成年小鼠大腦需要使用30mL以上的SCALEVIEW^®-A2。

　?。玻该骰枰?周以上時(shí)間。浸泡過(guò)程中，需在混勻器等設(shè)備中慢慢輕晃溶液。每天更換一次SCALEVIEW^®-A2溶液，效果更佳。

　　３．通過(guò)SCALEVIEW^®-A2溶液浸泡后，小鼠大腦體積會(huì)單方向膨脹10~30%水平。

3.　觀察

⑥　觀察SCALEVIEW^®-A2處理后的小鼠大腦樣品使用雙光子激光顯微鏡、奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25SVMP多光子專用物鏡?；蚴褂眉?/span>

       光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。

⑦　觀察結(jié)束后，可將小鼠大腦再次浸泡于SCALEVIEW^®-A2溶液中，保存溫度4℃。

◆SCALEVIEW^®-A2處理案例

圖1. SCALEVIEW^®-A2透明化小鼠大腦案例

從左往右： SCALEVIEW^®-A2處理前的小鼠大腦；SCALEVIEW^®-A2浸泡兩周后的小鼠大腦

◆SCALEVIEW^®-A2觀察案例

圖2. 雙光子激光顯微鏡下獲取的Thy1-H小鼠大腦深層觀察圖像

使用奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XWMP多光子專用物鏡觀察圖像

比例尺：50 μm

圖3. 雙光子激光顯微鏡下獲取的Thy1-H小鼠大腦深層觀察圖像

使用奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XSVMP（NA.1.0 WD4 mm）多光子專用物鏡觀察圖像

圖4. 激光共聚焦顯微鏡下獲取的小鼠胰臟透明化圖像

　　對(duì)小鼠進(jìn)行灌流固定處理前，先使用Lectin Texas red對(duì)流入血管進(jìn)行標(biāo)記處理。灌流固定后，取出胰臟并用SCALEVIEW^®-A2進(jìn)行處理。圖為奧林巴斯（Olympus）公司物鏡：UPLSAPO30XS觀察下的圖像。

◆相關(guān)視頻（欲觀看視頻請(qǐng)點(diǎn)擊文字）

YFP-H小鼠海馬部成像視頻

使用奧林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XSVMP（NA1.0,WD4mm）多光子專用物鏡觀察圖像

YFP-H小鼠大腦的成像視頻

使用奧林巴斯（Olympus）公司XLSLPLN25XSVMP（NA0.90,WD8mm）多光子專用物鏡觀察圖像

組織透明化配套耗材：成像用透明室